Cinética Enzimática

Disciplina Opcional

Dados da disciplina

Carga horária: 60 h

Período: 02/03/2015 a 13/03/2015

Horário: 09:00 às 14:00

Vagas: 15

Pré-requisitos:

Nenhum.

Descrição

Unidade 1: Reações enzimáticas simples.

1. A equação de Michaelis-Menten de equilíbrio rápido.

2. A equação Briggs-Haldane do estado estacionário.

3. Reações reversíveis e a relação de Haldane.

4. Determinação gráfica de KS, Vmax, e Vmax/KS:

i. gráfico recíproco de Lineweaver-Burk;
ii. gráfico de Hanes-Woolf;
iii. gráfico de Eadie-Scatchard;
iv. gráfico de Eisenthal-Cornish-Bowden;
v. gráfico de Dixon t.

5. Forma integrada da equação de Michaelis-Menten.

 

Unidade 2: Sistemas de inibidores.

1. Inibição simples e o gráfico de Dixon para determinar Ki.

2. Inibição parcial e mista.

3. Inibição de alta afinidade (ou pseudo-irreversível).

 

Unidade 3: Ativação em sistemas cinéticos hiperbólicos.

1. Ativação não-essencial.

2. Desinibição e desativação.

 

Unidade 4: Equilíbrio rápido em sistemas com dois substratos.

1. Esquemas de Mecanismos cinéticos e equações de velocidade:

i. Mecanismos aleatórios;
ii. Mecanismo ordenado;
iii. Mecanismo Ping-pong.

2. Determinação gráfica.

 

Unidade 5: Efeitos do pH e da temperatura.

1. Efeitos na estabilidade da enzima.

2. Vmax versus pH e as equações Dixon-Webb e gráficos.

3. Equações de Van't Hoff e Arrhenius e gráficos.

 

Unidade 6: Enzimas cooperativas de múltiplos sítios.

1. Equação e modelo de interação Adair-Pauling para interação sequencial simples.

2. Equação do modelo de Hill.

3. Modelo e equação de transição cooperativa de Monod-Wyman-Changeaux.

4. Determinação Gráfica de KR, Vmax, KA, Ki, L, n. 5. Histerese.

Objetivos

Ao final do curso o estudante será capaz de:

(1) Deduzir as equações dos mecanismos enzimáticos básicos;

(2) Determinar por meio de gráficos, bem como programas computacionais, os parâmetros cinéticos Km, Ki, Ka, Vmax, kcat;

(3) Analisar os dados de cinética e deduzir mecanismos de reação incluindo inibição e ativação.

Estrutura do Curso

Aulas Teóricas. Uma aula diária de 5h durante duas semanas, com uma prova na última aula.

Forma de Avaliação

Prova escrita.

Bibliografia

1. Segel IH. Enzyme Kinetics. John Wiley and Sons, New York, 1975.

2. Cornish-Bowden E. Fundamentals of Enzyme Kinetics. Portland Press, London, 1995.

3. Dixon M, Webb EC. Enzymes. Academic Press, New York, 1979.

4. Kurganov BI. Allosteric Enzymes. Wiley & Sons, Chichester, 1982.

5. Webb JL. Enzyme and Metabolic Inhibitors. Academic Press, New York, 1963.

6. Viratelle O. Enzimología. Omega, Barcelona, 1976.

7. Zivin JA, Waud DR (1982) How to analyze binding, enzyme and uptake data. Life Sci. 30, 1407-1422.

8. Todhunter JA (1979) Reversible Enzyme Inhibition. Methods Enzymol. 63, 383-411.

9. Williams JW, Morrison JF (1979) The Kinetics of reversible Tight-Binding Inhibition. Methods Enzymol. 63, 437-467.

10. Neet KE, Ainslie GR (1980) Hysteretic Enzymes. Methods Enzymol. 64, 192-226.

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